Stále se rozšiřující aplikace SPM přístrojů přinesly možnost zobrazovat bez větších problémů vzorky přímo v kapalných prostředích. To umožňuje zobrazit povrch vzorku s minimální silou mezi hrotem a povrchem a vyhnout se tak například poškození povrchu biologického preparátu. Režimy AFM používané v kapalném prostředí pro biologické vzorky jsou prakticky totožné s klasickými analýzami AFM. Ve větší míře se však využívá poklepový režim. Článek předkládá přehled typických aplikací AFM se skenerem pro kapalná prostředí (liquid scanner)., Roman Kubínek, Milan Vůjtek, Renata Holubová, Zdeňka Zapletalová, Hana Kolářová., and Obsahuje seznam literatury
Growing worldwide efforts to replace (reduce) animal testing and to improve alternative in vitro tests which may be more efficient in terms of both time, cost and scientific validity include also genotoxicity/mutagenicity endpoints. The aim of the review article was to summarize currently available in vitro testing approaches in this field, their regulatory acceptance and recommended combinations for classification of chemicals. A study using the combination of Comet Assay performed on two cell lines and the Chromosomal Aberration test on human peripheral lymphocytes was performed with the aim to predict the genotoxic potential of selected paraben esters, serving as a model chemical group. Parabens are widely used in consumer products as preservatives and have been reported to exhibit inconclusive results in numerous genotoxicity studies. The Comet Assay identified Ethylparaben and Benzylparaben as potentially genotoxic. The Chromosomal Aberration test revealed weak genotoxic potential in case of Ethylparaben and positive genotoxicity in case of Butylparaben, Propylparaben and Isopropylparaben. The main reasons for variability seem to be limited water solubility of parabens, determining their bioavailability at the cellular level, and absence of metabolic activation in the Comet Assay. The results confirmed that the Comet Assay should serve as a screening test and should not be used as a stand-alone method for classification of genotoxicity. The weight of evidence approach in risk assessment should be supported with data generated with the use of human relevant in vitro methods based on cells / tissues of human origin.
Studiu vlastností karcinomu prsu je tradičně věnována velká pozornost. V minulosti byl nejdůležitějším faktorem rozhodujícím o indikaci adjuvantní terapie stav axilárních lymfatických uzlin. V současné době je však větší důraz kladen na vlastnosti primárního tumoru. Základní léčebná strategie se stanovuje již v době stanovení diagnózy maligního onemocnění. Proto je velmi důležité znát výpovědní hodnotu, spolehlivost a úskalí vyšetření jednotlivých prognostických a prediktivních markerů karcinomu prsu. Tato studie se zabývá srovnáním vlastností nádoru stanovených před operací s těmi, které jsou k dispozici po operaci. Jedná se o retrospektivní analýzu údajů z lékařské dokumentace 411 pacientek s časným primárním karcinomem prsu léčených primárním chirurgickým výkonem. Statistickou analýzou byla prokázána dobrá nebo velmi dobrá shoda mezi předoperačním a pooperačním stanovením u invazivity nádoru, histologického typu, gradingu, proliferační aktivity a zastoupení hormonálních receptorů a receptorů HER-2/neu. Naopak měření velikosti tumoru a stanovení počtu ložisek tumoru vykazovalo špatnou korelaci. Největší rozdíly jsme popsali u žen s předoperačně histologicky diagnostikovanými karcinomy in situ, a to jak pro určení velikosti nádoru a počtu nádorových fokusů, tak i pro samotné stanovení invazivity. Jako velmi nespolehlivé bylo třeba označit předoperační vyšetření stavu axilárních lymfatických uzlin – falešná negativita tohoto vyšetření přesahovala 92 procent., Great attention is traditionally given to the investigation of breast cancer characteristics. In the past, axillary lymph node status was the most important factor for the decision on adjuvant therapy. At present, higher accent is being laid on the characteristics of the primary tumor. Basic treatment strategy is being set just at the time of setting the diagnosis of malignant disease. For this reason it is very important to know the validity, reliability and pitfalls of the examinations of breast cancer prognostic and predictive markers. This study deals with the comparison of breast cancer characteristics set at the time of diagnosis with those verified histologically after surgery. This retrospective trial analyses data from medical records of 411 patients with early primary breast cancer treated with primary surgical procedure. Statistical analysis proved good or very good agreement between preoperative and postoperative results in following cancer characteristics: invasivity, histological type, grading, proliferative activity and percentage of steroid hormone receptors and HER-2/neu receptors. On the contrary, measurements of tumor size and settings of the numbers of tumor foci exhibited poor correlation. Biggest disagreements were described in women with preoperative histological diagnosis “carcinoma in situ”: the differences were proven both for the tumor size and the number of tumor foci, and also for setting of invasiveness itself. Preoperative investigation of the axillary lymph node status has to be considered very unreliable – the false negative rates of this investigation exceeded 92 percent., Dušan Kolařík, Jelena Vitalijevna Levá, Petr Křepelka, Miroslav Verner, Markéta Trnková, Hana Kolářová, and Lit.:
Mikroskopie atomárních sil je moderní experimentální metoda užívaná k získání obrazu jak vodivých, tak nevodivých vzorků, proto mohou být zobrazovány kromě vodičů také organické materiály, izolátory, keramické látky, skla, polymery, biologické makromolekuly nebo žijící i nežijící buňky. Některé z těchto materiálů mohou být zobrazovány v různých prostředích, jako je vzduch, kapaliny, roztoky, vakuum či nízké teploty. To nám dává možnost pozorovat dynamické jevy v buňkách a probíhající buněčné procesy v reálném čase za podmínek, které zcela odpovídají jejich přirozenému prostředí [1], [2]., Kateřina Tománková, Hana Kolářová, Roman Kubínek, Milan Vůjtek, Hana Dušková., and Obsahuje seznam literatury
An atomic force microscopy (AFM) is used to the morphology imaging of tumour cell lines and processes taking place in a photo-dynamic therapy. The basic condition for a high-quality scan is a proper fixation of microscopic slides with no morphology destruction of whole cells and cell structures. A new microscopy development allows scanning in various media, e.g. liquids. For this purpose we use100 μm dry scanner and noncontact mode. As a biological material under study we examined cell lines A549 (bronchogenic carcinoma) and G361 (dermal melanoma). A cell scanning is limited by the apparatus design and therefore we use a combination of AFM and an inverse optical microscope. The aim of this work is a study of photo-dynamic effects on tumour cell lines using an atomic force microscope. The photo-dynamic effect is initialised by ClAlPcS2 sensitizers, the light source is LED diode emitting the wavelength 640 nm. A therapeutic effectiveness is detected with Synergy HT fluorescent reader together with a fluorescent marker CM-H2DCFDA. Thus we measure the kinetics of free radicals (ROS) production and ROS production after sample exposure 15 Jcm-2. Cells are imaged before and after photo-dynamic therapy (PDT) in two kind of picture: topography and phase imaging. From the results it can be concluded that before PDT the cells have smooth fine surfaces without pronounced roughness and after PDT the cells are cracked and it is possible to observe a manifestation of apoptis. and Mikroskopii atomárních sil (AFM) užíváme k zobrazení morfologie nádorových buněčných linií a procesů provázejících léčbu pomocí fotodynamické terapie. Základem získání kvalitního skenu je vhodná fixace preparátu, bez porušení morfologie celých buněk i jednotlivých buněčných struktur. Nové trendy v mikroskopii dávají možnost skenovat v různých prostředích, jako jsou například kapaliny. K získávání skenů užíváme 100mikrometrový suchý skener a nekontaktní mód. Jako biologický materiál jsme studovali buněčné linie A549 (bronchogenní karcinom) a G361 (kožní melanom). Skenování buněk je limitováno konstrukcí aparatury, proto užíváme kombinaci AFM a inverzního optického mikroskopu. Cílem práce je studium fotodynamického efektu na uvedených nádorových buněčných liniích pomocí mikroskopie atomárních sil. K navození fotodynamického jevu užíváme sensitizery ClAlPcS2 a zdrojem světla jsou LED diody vlnových délek 640 nm. Účinnost fotodynamické terapie detekujeme pomocí Synergy HT fluorescenčního readeru spolu s fluorescenční značkou CM-H2DCFDA. Měříme tak kinetiku produkce volných radikálů (ROS) a produkci ROS po dosažení dávky 15 Jcm-2. Zobrazujeme buňky před a po fotodynamické terapii (PDT) ve dvou typech zobrazení: topografie a fázové zobrazení. Z výsledků plyne zjištění, že před PDT mají buňky hladký jemný povrch bez větších nerovností a po PDT jsou buňky rozpraskané a je možné pozorovat projevy apoptózy.