We present data supporting the hypothesis that the lysosomalautophagy pathway is involved in the degradation of intracellular triacylglycerols in the liver. In primary hepatocytes cultivated in the absence of exogenous fatty acids (FFA), both inhibition of autophagy flux (asparagine) or lysosomal activity (chloroquine) decreased secretion of VLDL (very low density lipoproteins) and formation of FFA oxidative products while the stimulation of autophagy by rapamycine increased some of these parameters. Effect of rapamycine was completely abolished by inactivation of lysosomes. Similarly, when autophagic activity was influenced by cultivating the hepatocytes in “starving” (amino-acid poor medium) or “fed” (serum-supplemented medium) conditions, VLDL secretion and FFA oxidation mirrored the changes in autophagy being higher in starvation and lower in fed state. Autophagy inhibition as well as lysosomal inactivation depressed FFA and DAG (diacylglycerol) formation in liver slices in vitro. In vivo, intensity of lysosomal lipid degradation depends on the formation of autophagolysosomes, i.e. structures bringing the substrate for degradation and lysosomal enzymes into contact. We demonstrated that lysosomal lipase (LAL) activity in liver autophagolysosomal fraction was up-regulated in fasting and down-regulated in fed state together with the increased translocation of LAL and LAMP2 proteins from lysosomal pool to this fraction. Changes in autophagy intensity (LC3-II/LC3-I ratio) followed a similar pattern., V. Škop ... [et al.]., and Obsahuje seznam literatury
Superresolution microscopy enables to see previously hidden details of cellular structures. However, it requires to use high irradiation intensities that may cause artefacts and photodamage of fragile biological samples. Newly developed confocal technique and Olympus super resolution (OSR), that combines spinning disk confocal with structured illumination microscopy, represents a reliable and fast superresolution avoiding photodamage. We demonstrate an OSR microscope platform, that enables subsecond, multicolour data acquisition. It also provides access to subdiffraction structured illumination imaging. We show that OSR allows live-cell experiments without any noticeable cellular damage. OSR system has an improved lateral (∼∼2) and axial (∼∼3) resolution compared with conventional confocal imaging. Moreover, OSR is compatible with both fixed and live cell imaging. and Superrezoluční mikroskopie umožňuje zobrazovat dříve nepoznané detaily jemných buněčných struktur. Vyžaduje však světelný zdroj vysoké intenzity, který může způsobovat artefakty a foto-poškození citlivých biologických vzorků. Nově vyvinutá konfokální technologie superrezolučního mikroskopu Olympus (OSR) kombinuje rotující disk se strukturovaným mikroskopickým osvětlením a představuje spolehlivé a rychlé superrezoluční zobrazení, které minimalizuje foto-toxicitu. V tomto příspěvku představujeme platformu OSR mikroskopu, která umožňuje subsekundovou vícebarevnou akvizici dat a subdifrační zobrazení ve strukturovaném osvětlení. OSR umožňuje zobrazování živých buněk bez jejich zjevného poškození. Ve srovnání s konvenčním konfokálním zobrazováním má systém OSR vylepšené laterální (~ 2) a axiální (~ 3) rozlišení. OSR je navíc kompatibilní se zobrazováním fixovaných i živých buněk.